Рабочая классификация красителей, используемых в биологической микроскопии

Рабочая классификация красителей, используемых в биологической микроскопии

Существует немало рабочих классификаций красителей, использующихся в биологии. При изложении материала авторы редко придерживаются чёткого разделения. Обычно различают четыре больших группы красителей:

1. Основные (или ядерные) красители. Они избирательно окрашивают ядра клеток и базофильные структуры. Кстати, сам термин «базофильный» появился по названию этой группы красителей, так как в переводе с латинского basis — основной.
2. Кислые (или цитоплазматические) красители. Окрашивают преимущественно цитоплазму, реже клеточные стенки и тому подобного.
3. Нейтральные красители. К этой группе, по нашему мнению, должны быть отнесены и такие красители, которые избирательно окрашивают компоненты цитоплазмы, например, судан III или нильский синий, окрашивающие капельки жира.
4. Флюорохромы. Группа красителей, способных флюоресцировать при той или иной длине волны возбуждающего света. Несмотря на то, что мы выделили эти красители в самостоятельную группу, большинство из них следовало бы отнести к цитоплазматическим или, реже, к ядерным красителям.

Ядерные красители

Ядерные красители представляют собой едва ли не самую многочисленную группу красителей вообще. Основная цель обработки данными веществами состоит в том, чтобы выявить материал, близкий к ДНК или РНК. По механизму окрашивания ядерные красители делят на две группы, принципиально отличающиеся друг от друга. Это основные красители и протравные красители.

Основные красители

Применение основных красителей (все они являются «катионными») основано на образовании соединений типа солей в присутствии ДНК или РНК.

1. Азокрасители:
   — янус зелный В;
   — бисмарк коричневый.
2. Сафранины:
   — сафранин Т;
   — сафранин А;
   — сафранин О;
   — феносафранин.
3. Оксазиновые красители:
   — бриллиантовый крезиловый синий;
   — крезиловый прочный фиолетовый.
4. Тиазины:
   — тионин;
   — азуры С, А, В;
   — метиленовый синий;
   — толуидиновый синий.
5. Трифенилметановые:
   — пара-розанилин;
   — кристаллический фиолетовый;
   — метиловый фиолетовый;
   — метиловый зелёный;
   — альциановый синий;

Протравные красители

В основу методик применения протравных красителей легла способность ряда соединений образовывать ярко окрашенные лаки с ионами металлов — лития, железа, хрома. В эту группу входят:

1. Наиболее известные и используемые красители:
   — гематоксилин;
   — кармин (карминовая кислота);
   — ализарин-цианин;
   — ализарин;
   — бразиллин;
   — галлоцианин.
2. Малоизвестные и редко применяющиеся красители:
   — пурпурин;
   — ализариновый синий;
   — ализариновый чёрный;
   — ализариновый зелёный;
   — антрапурпурин;
   — хинализарин;
   — чисто-синий В;
   — антраценовый синий.

В зависимости оттого, ион какого металла входит в состав протравного реагента, конечный цвет окраски может меняться от красного до зеленовато-чёрного. Примеры такой зависимости приведены в таблице.

Цитоплазматические красители

Эта группа красителей представлена большей частью сульфоновыми и карбоновыми кислотами, которые в тканях прочно связываются с белками и в результате окрашивают большинство внеядерных структур:

• эозин;
• аурамин О;
• эритрозин;
• родамин В;
• родамин 3G;
• родамин 6G;
• пиронин G;
• акрифлавин;
• флюоресцеин;
• акридиновый оранжевый;
• конго красный;
• акридиновый жёлтый;
• криофосфин;
• нейтральный красный;
• толуидиновый синий.

Цитоплазматические красители в сочетании с фосфорно-вольфрамовой кислотой, фосфорно-молибденовой кислотой могут окрашивать специфические структуры клеток и тканей, например, коллаген. В большинстве методик цитоплазматические красители используются для контраста после окраски ядерными красителями. Несколько реже прибегают к такому свойству цитоплазматических красителей, как способность окрашивать живые клетки без нарушения функций последних (так называемые витальные красители); в таких методиках применяют очень большие разведения красителей — от 1:1000 до 1:20000.

Нейтральные красители

Группа нейтральных красителей невелика. Например, важное практическое значение имеют красители, окрашивающие жиры:

• судан III;
• судан IV;
• судан чёрный;
• нильский синий.

Флюорохромы

Флюорохромы в данной классификации стоят особняком, потому что эта группа включает и кислые, и основные красители.

Главной отличительной чертой всех этих соединений является способность излучать свет определённой длины волны под воздействием лучей ультрафиолетового, фиолетового и синего спектра. Молекула красителя, поглотив квант падающего света, испускает световое излучение большей длины волны, чем длина волны падающего света. Так, например, флюоресцеин, поглощая свет с длиной волны 420-490 нм, излучает свет с длиной волны 520-540 нм. При этом объекты, окрашенные флюоресцеином в люминесцентном микроскопе, светятся зелёным светом.

Некоторые области применения флюорохромов приведены в таблице.

Книги Список книг

Модифицированные фталоцианины и их структурные аналоги
В настоящей монографии представлен обзор данных по строению, методам получения и ...

Труды по органической химии
Выдающийся русский учёный Н. Н. Зинин вошёл в историю химии как автор классических ...

Термодинамические аспекты неорганической химии
Книга из Кембриджской серии учебных пособий по химии и биохимии, которая может ...

Органические полупроводники
Книга посвящена вопросу, которому в настоящее время придаётся огромное значение ...